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稀釋平板測數法

放大字體  縮小字體 發布日期:2010-09-01  瀏覽次數:8905
核心提示:一、實驗目的了解稀釋平板計數的原理,掌握涂抹平板培養法和混合平板培養法,認識細菌、放線菌、霉菌的菌落特征。二、實驗原

一、實驗目的

了解稀釋平板計數的原理,掌握涂抹平板培養法和混合平板培養法,認識細菌、放線菌、霉菌的菌落特征。

二、實驗原理

    稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法,即一個菌落代表一個單細胞。計數時,首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液,盡量使樣品中的微生物細胞分散開,使成單個細胞存在(否則一個菌落就不只是代表一個細胞),再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布于平板中的培養基內。經培養后,由單個細胞生長繁殖形成菌落,統計菌落數目,即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數,故又稱活菌計數。一般用于某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

三、實驗器材   

    1.活材料:蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑。

2.培養基:牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基附錄三、1)

3.器材:90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等

四、實驗方法

    1.樣品稀釋液的制備  準確稱取待測樣品l0g,放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置搖床上振蕩20 min,使微生物細胞分散,靜置20-30s,即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管,吸取10-1稀釋液lml,移入裝有9ml無菌水的試管中,吹吸3次,讓菌液混合均勻,即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1 ml,移入裝有9ml無菌水的試管中,也吹吸三次,即成l0-3稀釋液;以此類推,連續稀釋,制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液(圖22-1)。

22-1  平板計數法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養

用稀釋平板計數時,待測稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時,稀釋度應高,反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時,采用10-7、10-8、10-9稀釋度,測定土壤細菌數量時,采用10-4、10-5、10-6稀釋度,測定放線菌數量時,采用l0-3、10-4、10-5稀釋度,測定真菌數量時,采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

2.平板接種培養  平板接種培養有混合平板培養法和涂抹平板培養法兩種方法。

    (1)混合平板培養法  將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼,每一號碼設置三個重復,用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中,同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中,再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時,吸管可不必更換)。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細菌培養基(圖22-2),輕輕轉動平板,使菌液與培養基混合均勻,冷后倒置,適溫培養。至長出菌落后即可計數。

2)涂抹平板計數法  涂抹平板計數法與混合法基本相同,所不同的是先將培養基熔化后趁熱倒入無菌平板中,待凝固后編號,然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設三個重復)。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻(圖22-3),每個稀釋度用一個滅菌刮鏟,更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時,也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min,使菌液滲透入培養基內,然后將平板倒轉,保溫培養,至長出菌落后即可計數。

五、實驗作業:

  將實驗結果填入下表中

稀釋度

10-7

10-8

10-9

菌落數

1

2

3

平均

1

2

3

 平均

1

2

  3

 平均

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1g樣品活菌數

 

 

 

計算結果時,常按下列標準從接種后的3個稀釋度中選擇一個合適的稀釋度,求出每克菌劑中的含菌數。

    (1)同一稀釋度各個重復的菌數相差不太懸殊。

    (2)細菌、放線菌、酵母菌以每30—300個菌落為宜,霉菌以每10—100個菌落為宜。

選擇好計數的稀釋度后,即可統計在平板上長出的菌落數,統計結果按下式計算。

混合平板計數法:

每克樣品的菌數=同一稀釋度幾次重復的菌落平均數×稀釋倍數

涂抹平板計效法:

    每克樣品的菌數=同一稀釋度幾次重復的菌落平均數×10×稀釋倍數

編輯:foodadmin

 
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關鍵詞: 稀釋 平板
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